教你如何給葡聚糖凝膠的分類方法

　　1.乙醇浸泡:在室溫下，將幹粉浸泡於(yu) 50-60%乙醇中至少24小時，並不斷攪拌以保證凝膠溶脹，用無鹽水洗去殘存的乙醇濾幹;

　　2.無鹽水浸泡:室溫下，在無鹽水中充分溶脹24小時，間隙攪拌，以保證凝膠的*溶脹，然後;

　　3.鹽酸浸泡:在常溫下再用0.2NHCl浸泡12小時，間隙攪拌，濾幹，水洗至中性;

　　4.將溶脹好的凝膠脫氣後(真空抽濾或超聲波)根據裝柱要求一次性置入柱內(nei) ，注意保持濕態裝柱，並避免柱內(nei) 產(chan) 生氣泡或斷層;

　　5.上樣前平衡層析柱至少3-5個(ge) 柱體(ti) 積直到記錄儀(yi) 基線變得平穩為(wei) 止(流出液的PH值等於(yu) 上柱的Buffer的PH值);

　　6.凝膠過濾的上樣量一般為(wei) 5%的柱床體(ti) 積，我們(men) 建議初次上樣控製在1-2%的床體(ti) 積，視分離情況可以調整;脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體(ti) 積，柱高的選擇也與(yu) 分離要求相關(guan) ，柱高控製在40-50cm以下，過高的凝膠層會(hui) 引起較大的反壓，應當盡可能避免。難分離物質要有一定柱高和流速控製，脫鹽時高徑比為(wei) 5:1即可;

　　7.洗脫方法:可以用無鹽水，也可以采用上柱時的緩衝(chong) 液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化;

　　8.在位清洗(CIP)凝膠使用十次後作一次CIP，目的是去除柱床內(nei) 沉澱的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個(ge) 柱體(ti) 積，再以至少三個(ge) 柱體(ti) 積平衡緩衝(chong) 液再生。