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科普一下GelRed的作用是什麽

更新時間:2019-06-18  |  點擊率:1495
   GelRed 和GelGreen 是兩種集高靈敏、低毒性和超穩定於一身的的熒光核酸凝膠染色試劑。其水溶染色劑通過美國環保局安全認定,廢棄物可直接倒入下水道,而不會造成任何環境汙染。

  目前大多數商業(ye) 化的核酸染料(凝膠染色試劑)總是在安全性、穩定性和靈敏性等方麵不*令人滿意。例如,雖然 EB (溴化乙啶)作為(wei) 目前使用廣泛的核酸凝膠染色試劑,能夠在多數應用中提供可以接受的靈敏度,但它是一種高誘變性的化學物質。而且EB染色後具有較高的背景熒光信號。

  SYBR Green I 和 SYBR Gold 也被廠家宣傳(chuan) 為(wei) 靈敏的凝膠染色試劑。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微堿性電泳緩衝(chong) 溶液或預製凝膠中會(hui) 快速降解,穩定性差導致染色效果極不可靠。 SYBR safe 被認為(wei) 是市場上較為(wei) 安全的核酸染料 ,但它的染色效果還遠不及 SYBR Green I 。

  至於(yu) 國內(nei) 有公司宣稱的新產(chan) 品Goldview,我們(men) 不想多加評論。因為(wei) 從(cong) 極為(wei) 相似的對比試驗結果來看,該產(chan) 品似乎就是AO(丫啶橙 ,一種劇毒產(chan) 品,且熒光亮度不佳)。請看Goldview 與(yu) AO 對比試驗結果(其中Goldview是從(cong) 國內(nei) 某公司采購,AO則來自SIGMA,報告來自開放生物)

  GelRed 和 GelGreen 無論用於(yu) 預製凝膠染色還是凝膠電泳後染色,都表現出了*的靈敏度。為(wei) 配合 312 nm UV 凝膠成像係統而設計的 GelRed ,在使用了我們(men) 新開發的具有的試驗步驟後(該試驗步驟中使用稀釋的 NaCl 溶液替代傳(chuan) 統的 TBE 緩衝(chong) 溶液),在凝膠電泳後染色中優(you) 於(yu) 或者至少相當於(yu) SYBR Gold 。但與(yu) SYBR Gold 不同, GelRed 在預製凝膠中使用時仍然有*的靈敏度,事實上GelRed 在檢測低濃度、微量 DNA 方麵比 EB 表現出更高的靈敏度,尤其對小分子量的 DNA 檢測非常靈敏(圖1)。 GelGreen 可以滿足使用 488 nm 激光凝膠掃描儀(yi) 或者可見光激發的 Dark Reader 的研究人員的使用要求。 GelGreen 無論是在預製凝膠還是凝膠電泳後染色中都與(yu) SYBR Green I 靈敏度相當,但不存在後者的不穩定性問題。實際上, GelRed 和 GelGreen ,特別是 GelRed 非常穩定,可以長期在室溫下保存。當這兩(liang) 種染料稀釋在 TBE 或者類似的電泳緩衝(chong) 溶液中時甚至可以使用微波爐加熱,便於(yu) 采用常規方法製備預製凝膠。含有染料的預製凝膠可以成批製備,長期保存。

  同樣重要的是, GelRed 和 GelGreen 相比 EB 或 SYBR Green I 提高了安全性。 獨立的測試服務公司( Litron Laboratories, Inc. )進行的標準艾姆斯氏測試結果表明, 在 18.5 μ g /mL (該濃度遠高於(yu) 推薦用於(yu) 電泳後染色的 約 4 μ g/mL 的 3X 染色液 )濃度下, GelGreen 沒有誘變性,而 GelRed 也僅(jin) 在 S9 代謝活化時有微弱的誘變性。 GelRed 和 GelGreen 的特殊化學結構使其難以穿透細胞膜進入細胞,正是這一特性降低了染料的細胞毒性。如圖3。相反, SYBR Green I 廣泛地用於(yu) 活細胞線粒體(ti) 和核 DNA 染色,這正是由於(yu) 它能快速的被細胞吞入。由於(yu) 已知 SYBR Green I 對紫外線導致的突變有強烈的增強作用( Ohta et al. Mutat. Res. 492 , 91(2001) ),因此它的高細胞膜透性使它在紫外環境觀察時成為(wei) 凝膠染色的主要有害物質。