CCK8試劑盒日本同仁常見問題解答(二)

 　　上篇文章，我們已經介紹了一部分CCK8試劑盒日本同仁的常見問題，本文將繼續為大家講解。

　　1、實驗之前，是否需要先檢測一下培養(yang) 基和CCK-8是否會(hui) 反應?建議使用一個(ge) 孔作一下檢測，因為(wei) 有培養(yang) 基中可能含有氧化還原反應的物質，在正式實驗之前有必要先確認培養(yang) 基和CCK-8是否反應。一般正常在的OD值應該在0.4以下。

　　2、如果加入的藥物中含有金屬，是否會(hui) 有影響?金屬對CCK-8顯色有影響。當終濃度為(wei) 1 Mm的氯化亞(ya) 鉛、氯化鐵、硫酸銅會(hui) 抑製5%、15%、90%的顯色反應，使靈敏度降級。如果終濃度是10 Mm的話，將會(hui) 100%抑製。

　　3、CCK8試劑盒日本同仁試劑的保存條件?在避光條件下CCK-8試劑在4℃可保存一年。如果需要保存較長時間的話，推薦在-20℃下保存。但是CCK-8若反複解凍和冰凍將會(hui) 增加空白吸收，從(cong) 而影響檢測結果，若經常使用可將試劑存放在4℃冰箱內(nei) 保存。

　　4、如何減少由於(yu) CCK-8試劑在槍頭上或孔壁上的殘留所帶來的誤差?可以在加樣前用培養(yang) 基稀釋CCK-8試劑並混勻後加樣。

　　5、CCK8試劑盒日本同仁是什麽(me) 顏色?應該是粉紅色。若顏色不一樣，有可能會(hui) 影響測定。

　　6、設定參比波長的目的是什麽(me) ?必須設定嗎?不一定要設定。CCK-8試劑在參比波長沒有吸光度。設定參比波長的目的是為(wei) 了取出由於(yu) 樣品混濁所帶來的吸收。

　　7、說明書(shu) 上僅(jin) 寫(xie) 了96孔板的測定方法，如果使用24孔板貨12孔板，應該加多少量CCK-8試劑?一般情況下建議加入CCK-8試劑的量是培養(yang) 基體(ti) 積的1/10。

　　8、在CCK-8顯色過程中，如何終止反應?有一下幾種方法(96孔板)： 1、 在顯色反應後，將培養(yang) 板放置4℃冰箱內(nei) 。 2、 每孔加10 μl 0.1 M HCL溶液。 3、 每孔加10 μl 1%(w/v)的SDS(十二烷基硫酸鈉)溶液。注意：反應停止後，應在24小時之內(nei) 測定。

　　9、必須預培養(yang) 細胞嗎?不一定。如果要向保持細胞的狀態，建議預培養(yang) 細胞。如果不做細胞預培養(yang) ，細胞內(nei) 的脫氫酶可能會(hui) 不穩定。也有人不做細胞預培養(yang) ，但在做標準曲線和檢測時需要統一檢測條件。

　　10、預培養(yang) 後，更換培養(yang) 基需要細胞計數嗎?一般情況下用胰蛋白酶處理對數增長期的細胞，用血球計數盤計數，製備成一定濃度的細胞懸液即可。如果想要精密計數細胞的話，可以預培養(yang) 後取培養(yang) 基用血球計數盤進行計數。

　　11、CCK8試劑盒日本同仁對於(yu) 不同的細胞，靈敏度是否一樣?不一樣，懸浮細胞與(yu) 貼壁細胞相比較難染色。對於(yu) 貼壁細胞，一般加入CCK-8培養(yang) 1-4小時吸光度已經很高，但對於(yu) 懸浮細胞則可能吸光度較低，可以通過延長CCK-8的加入時間或增加細胞數量來解決(jue) 。

　　12、懸浮細胞和貼壁細胞在數量上有何區別?懸浮細胞由於(yu) 染色比較困那，一般需要增加細胞數量和延長培養(yang) 時間。貼壁細胞染色比較容易，若細胞數量過大，有時吸光度會(hui) 超過酶標儀(yi) 的讀數。

　　13、應該每次做標準曲線嗎?建議每次做。雖然細胞是一樣的，但是細胞的狀態不一定一樣，對於(yu) 狀態不一樣的細胞，建議每次做標準曲線。如果試劑的批號不一樣，靈敏度可能會(hui) 有輕微的差異，對於(yu) 不同的批號建議分別做標準曲線。

　　14、有時在藥物作用情況下，細胞已經死亡，但是脫氫酶的活性還在，是否能計算細胞數量?不能。由於(yu) CCK8試劑盒日本同仁是通過和細胞內(nei) 的脫氫酶進行反應間接反映活細胞數量，如果細胞已經死亡，但脫氫酶的活性還在，則試劑測定的細胞數量將會(hui) 比真實值高，不能真實反映活細胞數量，建議采用別的方法測定。

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