膠原酶I的化學本質及使用

　　膠原酶的化學名為(wei) 膠原蛋白水解酶(Collagenase)，它能在生理PH和溫度條件下特異性地水解天然膠原蛋白的三維螺旋結構，而不損傷(shang) 其它蛋白質和組織。

　　膠原酶I的化學本質是一種蛋白酶，它能夠特異性的結合 Pro-X-Glyc-Pro序列中，中性氨基酸(X)和甘氨酸之間的肽鍵。該序列高頻率的存在於(yu) 膠原中。膠原酶是*的一種可以降解廣泛存在於(yu) 結締組織中的具有三股螺旋的天然膠原纖維的蛋白酶。但同時，這對溫度、PH和導致蛋白質變性的各種因素均非常敏感，極易受到外界條件的影響而改變其本身的構象和性質。

　　膠原酶I僅(jin) 對細胞間質有消化作用而對上皮細胞影響不大。因此適於(yu) 消化分離纖維性組織、上皮及癌組織，可使上皮細胞與(yu) 膠原成分分離而不受損害。常用劑量為(wei) zui終濃度200U/ml(約為(wei) 1mg/mL)或0.03%~0.3%。

　　膠原酶I的使用

　　1.將漂洗、修剪幹淨的組織剪成1~2mm左右小塊

　　2.將組織塊放入離心管(三角燒瓶)中加入30~50倍體(ti) 積的膠原酶I溶液，旋緊蓋子(密封燒瓶)。

　　3.將燒瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱內(nei) ，每隔3min振搖一次，如能放在37℃的恒溫震蕩水浴箱中則更好。消化時間與(yu) 組織的類別很有關(guan) 係，對於(yu) 某些腫瘤組織或其他較致密結締組織，消化時間4~48h，對於(yu) 容易消化的組織可以采用37℃震蕩消化15~45min，也可以根據具體(ti) 情況而定。如組織塊已分散而失去塊的形狀，一經搖動即成細胞團或單個(ge) 細胞，可以認為(wei) 已消化充分。上皮組織經膠原酶消化後，由於(yu) 上皮細胞對此酶有耐受性，可能仍有一些細胞團未*分散，但成團的上皮細胞比分散的單個(ge) 上皮細胞更易生長，因此，如無特殊需要可以不必再進一步處理。

　　4.收集消化液(有時含個(ge) 別組織塊及沒有充分消化的組織碎屑則需用100目不鏽鋼網過濾)，離心1000r/min，5min，去除上清，用Hanks液或者無血清培養(yang) 液離心漂洗1~2次，去除上清，加培養(yang) 液製成細胞懸液，接種培養(yang) 瓶。

　　因為(wei) 膠原酶I分子顆粒比胰酶大，不容易過濾，因此可以用蔡式濾器過濾除菌。鈣、鎂離子和血清成分不會(hui) 影響膠原酶的消化作用，因而可用BSS(如D-hanks或者PBS)或含血清的培養(yang) 液配製。