脂質體2000轉染法的經驗分享

　　1、轉染前1天將0.5～2×105細胞接種於(yu) 24孔培養(yang) 板，並加入500ul不含抗生素的*培養(yang) 基，以保證轉染時細胞匯合達90～95%。

　　2、準備複合物

　　(1) 將0.8ug DNA稀釋於(yu) 50ul無血清無抗生素的培養(yang) 液中輕輕渾勻。

　　(2) 將2ul Lipofectamine2000稀釋於(yu) 50ul無血清無抗生素的培養(yang) 液中，輕輕渾勻，室溫孵育5分。注意：必須在25分內(nei) 進行。

　　(3) 5分後將它們(men) 混合，並輕輕渾勻，室溫孵育20分。

　　3、吸去培養(yang) 板的培養(yang) 基，用PBS或無血清培養(yang) 基()清洗細胞2次。

　　4、將複合物(總體(ti) 積100ul)加入培養(yang) 孔，前後搖動培養(yang) 板使其分布均勻。

　　5、將細胞放入培養(yang) 箱孵育4～6h後，可以更換含血清培養(yang) 液去除複合物(也可不用)。

　　6、24～48h後可以觀察轉入基因表達情況。

　　7、穩定轉染：換含血清培養(yang) 基24h後將細胞以1：10(或更高比例)傳(chuan) 代，1天後更換篩選培養(yang) 基篩選。

　　8、優(you) 化：要保證細胞匯合率達90～95%(比較高);DNA/ Lipofectamine2000比率1：0.5～1：5，一般細胞1：2～3.

　　脂質體(ti) 2000轉染法的主要優(you) 點是可用將DNA轉染至懸浮或者鐵壁細胞培養(yang) 、轉染效率相對較高、對基因片段大小的限製較小等，但是

　　陽離子脂質體(ti) 2000對細胞的毒性相對較高，為(wei) 了防止其毒性，要摸索好如下實驗條件：脂質體(ti) 2000與(yu) 質粒的比例、細胞轉染時間等。