你知道無內毒素質粒小提中量試劑盒的操作方法麽?

　　你知道無內毒素質粒小提中量試劑盒的操作方法麽?不知道沒關係，下麵讓我們一起來了解一下吧。
 

　　1、取50µL新鮮的菌液接種到15-50mL(勿超過50mL)的LB培養基，37oC震蕩培養14-16小時。室溫下5,000xg離心10分鍾，收集菌體，並盡可能的吸去上清。
 

　　2、加入2.5mLBufferA1(確保已加入RNaseA)，用移液器或渦流震蕩確保**沉澱重新懸浮。
 

　　3、加入2.5mLBufferB1,輕輕地反轉5-10次以混合均勻，然後靜置2-5分鍾至溶液粘稠而澄清。
 

　　4、加入600µLBufferN3,立即反轉5次，用手用力搖晃3-5次充分混勻，此時出現白色絮狀沉澱。
 

　　5、將離心管轉至高速離心機，在室溫下13,000xg離心10分鍾(若上清中有白色沉澱，可再次離心)。
 

　　6、定量吸取離心後的上清液至新的15mL管中(避免吸起沉澱)，加入0.1倍體積的EndoCleanBuffer，混勻後冰浴10分鍾，其間不時搖勻(若EndoCleanBuffer粘稠難吸，可將槍頭剪掉頭後再吸取)。
 

　　7、室溫下(冰浴取出後務必使溶液溫度恢複到23oC以上，否則溶液不分層)13,000xg離心10分鍾(也可在2,500xg離心15分鍾)。此時溶液分為兩層，上層水相含有質粒，下層紅色有機相含有。
 

　　8、將上層水相轉移至一個新的15mL管中，加入3mL的BufferN3及3mL的100%ethonal，用手用力甩5次以混勻，該混合溶液需要需馬上進行過柱吸附操作。
 

　　9、立即轉移6.0mL裂解液至帶收集管的DNA柱中，室溫下>2,500xg離心1分鍾，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重複此步直至所有的溶液通過DNA柱。
 

　　10、可選:向DNA柱中加入3.0mLBufferKB,室溫下>2,500xg離心1分鍾，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。
 

　　11、向離心柱中加入5mL70%乙醇，室溫下>2,500xg離心1分鍾，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重複步驟“11”。
 

　　12、將離心柱放回高速離心機中，室溫下>2,500xg開蓋離心10分鍾，以*去除殘留的乙醇。
 

　　13、將離心柱轉至一個新的15mL離心管中，向DNA柱膜的正中加入0.5mL的EndofreeElutionBuffer，室溫放置1分鍾，>2,500xg離心5分鍾，以洗脫質粒DNA。若想提高得率，可用洗脫得到的0.5mL的EndofreeElutionBuffer再洗脫一次，收集到新的離心管中。