Cellworld DMEM培養基(低糖)是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養基,是在MEM培養基的基礎上研製的。與MEM比較增加了各種成分用量,同時又分為高糖型(低於4500mg/L)和低糖型(低於1000mg/L)。高糖型有利於細胞停泊於一個位置生長,適於生長較快、附著較困難腫瘤細胞等。
DMEM是dulbecco's modified eagle medium的縮寫,所以其特點主要包括以下:
(1)氨基酸含量為依格爾培養基的2倍,且含有非必需氨基酸,如甘氨酸等;
(2)維生素含量為依格爾培養基的4倍;
(3)含有糖酵解途徑中的重要物質--丙酮酸;
(4)含有微量的鐵離子。
Cellworld DMEM培養基(低糖)主要有以下用途:用於成纖維細胞、神經元細胞、內皮細胞、雜交瘤細胞(SP2/0)、表皮喉癌細胞(HEP-2)、Hela(宮頸癌細胞)、CHO(中國倉鼠卵巢細胞)等細胞的培養,用於疫苗企業病毒株的傳代培養供後續抗原的製備,用作動物疫病病毒采樣及病毒分離和維持液的基礎液、免疫治療用細胞培養基礎液以及人病毒分離用生長液及維持液的基礎液。
一)準確稱量試劑:根據不同的菌類和用途,選擇適宜的培養基,培養基所需試劑必須純淨。
二)校正pH值:將稱量好的培養基各種成分放入容器內,標記劃線,加熱溶解,補充水分,測定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計測定。用1NNaOH和1NHCl調節pH值到適宜範圍內。
三)過濾:將玻璃漏鬥置鐵架上,再用DMEM低糖(含雙抗)紗布夾棉花或用濾紙放在漏鬥中,將上述培養基倒入其中過濾至透明。
四)分裝:將過濾後的培養基分裝於中試管或三角瓶內(試管內每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包紮好,準備滅菌。
五)滅菌:培養基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養細胞在水中煮沸後即被殺死,但細菌的芽胞有較強的抗熱性,須經高壓蒸汽滅菌才能達到滅菌的目的。
根據蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比幹熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,菌體吸收水分後,其蛋白質易於凝固變性,因為蒸汽的穿透力強,殺菌效果好。